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【答題贏好禮】尋找RNA提取最強知識青年

發布日期:2021年06月02日   瀏覽次數1212

為什么RNA提取這么難?

1. RNA為單鏈結構且有2’-OH存在,分子結構不穩定

2. RNase無處不在,且穩定性高

3. 樣本本身所含RNA豐度較低,難以獲得

4. 細胞中次生代謝物干擾RNA提取


快來和小師妹一起學習一下

提升RNA提取質量的六要素


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01 正確的樣本保存方法及條件

用于提取RNA的樣本應盡量采用新鮮樣本,并盡快在低溫凍存或保存液中保存,以抑制RNase的活性。動物組織和血液可在4℃或常溫條件下分別保存于RNAStore ReagentRNALock Reagent中。提取后的RNA應采用RNase-free H2O溶解后分裝凍存,長期保存建議凍存于-80℃。

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02 樣本均質徹底

徹底破碎細胞結構,能使細胞充分釋放RNA,并使裂解液充分浸潤,抑制核酸酶活性。樣本數量較少時可采用傳統的液氮研磨進行均質,當樣本數量較多時,可采用TGrinder H24R 組織研磨低溫均質儀一次可對24個樣本進行低溫均質處理。

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03 有效的RNase活性抑制

RNase活性的抑制效果決定了RNA提取的完整性。裂解液中的變性劑,能夠使蛋白變性、抑制RNase的活性。為了達到更好的RNase抑制效果,往往會在裂解液中額外加入β-巰基乙醇。β-巰基乙醇具有較強的揮發性,為更安全的提取RNA,可采用RNA Easy Fast快速總RNA提取試劑盒。該試劑盒采用與蛋白酶K相結合的形式,有效裂解細胞、抑制RNase活性。

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04 采用合適的樣本用量

當樣本量過大時,裂解液無法充分裂解細胞、抑制RNase活性, RNA的提取效率及完整性下降,同時還會使溶液pH偏堿性,影響RNA的穩定性并造成基因組的殘留。


當提取樣本量過小或本身RNA豐度偏低時,如血漿等無細胞或少細胞體液樣本,需使用專用的微量RNA提取試劑盒,RNAprep Pure微量樣本總RNA提取試劑盒配備Carrier RNA,能夠捕獲微量核酸,提高RNA的提取效率。

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05 選擇合適的RNA純化方式

RNA的純化可分為有機抽提、硅基質柱和磁珠純化等方式。硅基質柱法由于操作簡便、快速以及所獲得的RNA純度高等特點,被廣泛應用。此方法純化應用靈活,能夠與DNase I相結合,在提取RNA的過程中去除基因組DNA,如RNAprep Pure總RNA提取試劑盒(適合樣本:細菌動物組織植物組織血液石蠟包埋組織能夠在1小時內完成總RNA的提取和基因組DNA的去除。

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06 多糖多酚的去除策略

多糖多酚植物樣本是RNA提取中的難點。多糖理化性質與RNA相似,易形成共沉淀;多酚易氧化形成醌類,與RNA形成不可逆的結合,降低后續酶促反應的效率。RNAprep Pure多糖多酚植物總RNA提取試劑盒能夠有效的沉淀多糖、螯合多酚、抑制氧化酶活性,從而提高RNA的提取效率和純度。


只要掌握了這些要點

就能快速提升你的RNA提取質量啦!

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RNA提取最強知識青年

快來參加答題挑戰賽贏好禮吧!



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